COMMUNICATIONS AFFICHÉES AFEF 2021

Résumé N° : PO_02

ADAMTSL5, un nouveau régulateur dans le carcinome hépatocellulaire : à la recherche de son mécanisme d'action

A. Dobric*, C. Sequera, F. Maina (Marseille)

Introduction : Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est la 4ème cause de décès par cancer au monde. Très agressif, il représente plus de 90% des cancers du foie. Le très faible pronostic des patients atteints de CHC s’explique par un diagnostic tardif et une résistance aux thérapies. Il est donc crucial d’identifier de nouveaux marqueurs diagnostiques et thérapeutiques pour le CHC. Nos précédentes études ont permis d’identifier une nouvelle cible potentielle pour le CHC, encore jamais relié au cancer : ADAMTSL5 (A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs-like), une glycoprotéine sécrétée. Le mécanisme d’action d’ADAMTSL5 reste inconnu.

Patients et méthodes ou matériels et méthodes : L’expression d’ADAMTSL5 dans des cellules CHC (mHCC13 : issues du modèle murin Alb-R26Met) est déplétée par shRNA (mHCC13 shCTRL versus mHCC13 shAdamtsl5). L’étude des voies de signalisation est effectuée par Western blot et immunofluorescence. Des expériences de sauvetages sont réalisées à partir de l’obtention de milieux conditionnées enrichies en ADAMTSL5 tagguée par un Fc (ADAMTSL5-Fc) pour faciliter son traçage.

Résultats : L’analyse des lysats protéiques mHCC13 shCTRL et shAdamtsl5 par Western blot montre une déplétion de plusieurs signaux, notamment certains récepteurs à activité tyrosine kinase, fréquemment dérégulés dans les CHC et actuellement utilisés comme cible thérapeutiques en clinique. Cette déplétion est également associée à un changement drastique de la morphologie cellulaire. En particulier, les cellules mHCC13 shCTRL possèdent une morphologie de type «épithéliale» contrairement aux cellules mHCC13 shAdamtsl5 qui possèdent une morphologie allongée type «fibroblastoïde-like». Pour mieux comprendre ces phénomènes et étudier le mécanisme d’action d’ADAMTSL5, nous avons réalisés des expériences de sauvetage (ou Rescue) dans lesquelles nous avons incubées les cellules mHCC13 shCTRL et shAdamtsl5 avec la protéine recombinante ADAMTSL5-Fc. Les résultats obtenus démontrent une récupération spécifique de l’expression de certains récepteurs dans les cellules déplétées en ADAMTSL5. De plus, des analyses temporelles indiquent que le changement de morphologie cellulaire observé dans les cellules mHCC13 shAdamtsl5 semble pouvoir être réversé graduellement en les incubant avec ADAMTSL5-Fc. De façon plus surprenante, des marquages anti-Fc sur les cellules mHCC13 shAdamtsl5 après sauvetage, montre une localisation intra-cellulaire d’ADAMTSL5-Fc suggérant son internalisation. Tous ensembles, ces résultats suggèrent qu’après avoir été internalisé, ADAMTSL5 pourrait interagir fonctionnellement et/ou physiquement avec des molécules de signalisation. Pour mieux comprendre ce phénomène, des expériences de co-marquages, co-immunoprécipitation et protéomique sont en cours, et un model conditionnelle de déplétion d’ADAMTSL5 a été généré.

Conclusion:

L’auteur n’a pas transmis de déclaration de conflit d’intérêt

Remerciements : Ces travaux sont financés par la SATT Sud-Est, le Canceropôle Provence-Alpes-Côte d’Azur et partiellement supporté par l’Institut National du Cancer, Région Provence-Alpes-Côte d’Azur. A.D est financée par le Canceropôle PACA.

Références :
Fan Y., Bazai S.K., Daian F., Arechederra M., Richelme S., Temiz N.A., Yim A., Habermann B.H., Dono R., Largaespada D.A., Maina F. Evaluating the landscape of gene cooperativity with RTKs in liver tumorigenesis. Journal of Hepatology, 70(3): 470-482 (2019). PMID: 30529386.
Fan Y., Arechederra M., Richelme S., Daian F., Novello C., Caldero J., Di Tommaso L., Morcrette G., Rebouissou S., Donadon M., Morenghi E., Zucman-Rossi J., Roncalli M., Dono R., Maina F. A Phosphokinome-based screen uncovers new drug synergies for cancer driven by liver-specific gain of non-oncogenic RTKs. Hepatology, 66(5):1644-1661 (2017). PMID: 28586114.
Arechederra M., Daian F., Yim A., Sehrish S.K., Richelme S., Dono R., Saurin A.J., Habermann B.H., Maina F. Hypermethylation of gene body CpG islands predicts high dosage of functional oncogenes in liver cancer. Nature Communications, 9(1):3164 (2018). PMID: 30089774.
Arechederra M., Bazai S., Abdouni A., Sequera C., Mead T.J., Richelme S., Daian F., Audebert S., Dono R., Lozano A., Gregoire D., Hibner U., Allende D., Apte S.S., Maina F. ADAMTSL5 is an epigenetically activated gene that confers tumorigenic properties and drug resistance in hepatocellular carcinoma. Journal of Hepatology, Nov 13:S0168-8278(20)33758-2 (2020). PMID: 33197513.

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