COMMUNICATIONS AFFICHÉES AFEF 2021

Résumé N° : PO_09

Effet d’inducteurs de translecture sur des mutations non-sens d’ABCB11

M. Lapalus*, M. Almes, A. Thébaut, R. Amzal, E. Mareux, S. Amand, C. Bailly, T. Falguières, A. Davit-Spraul, L. Bidou, O. Namy, S. Rebuffat, E. Gonzales, E. Jacquemin (Orsay, Le Kremlin-Bicêtre, Paris)

Introduction : La cholestase intra-hépatique familiale progressive de type 2 (PFIC2) est une maladie autosomique récessive rare du foie due à des mutations du gène ABCB11, codant BSEP (Bile Salt Export Pump), le transporteur canaliculaire des acides biliaires. Les mutations non-sens (NS; codon stop prématuré, CSP) sont responsables des phénotypes les plus sévères1. Nous avons montré in vitro que la gentamicine induisait une translecture de CSPs d’ABCB11 et une expression d’une protéine entière partiellement fonctionnelle2. L’objectif était d’évaluer l’efficacité du CDX5-13 (un potentialisateur de la translecture induite par les aminoglycosides) et de l’extrait de champignon H74 à induire la translecture de huit mutations NS (p.Y354X, p.R415X, p.R470X, I528X, p.R1057X, p.R1090X, p.Q1215X and p.E1302X) identifiées chez des patients PFIC2.

Patients et méthodes ou matériels et méthodes : La capacité des molécules à induire la translecture des CSPs dans leur contexte nucléotidique (21 nucléotides) a été évaluée à l’aide d’un système double-rapporteur (Luciférase/β-Galactosidase) dans la lignée cellulaire NIH3T3. Les mutations NS des patients ont été reproduites par mutagénèse dirigée dans l’ADNc de Bsep de rat couplé à la GFP. Après transfection dans les lignées HEK293 et Can 10, les cellules ont été traitées pendant 24h. L’expression et la localisation cellulaire de la protéine entière produite ont été évaluées par western-blot et microscopies confocale et à épifluorescence. Des clones stables MDCK coexprimant BsepWT ou BsepR1090X et Ntcp (transporteur basolateral des acides biliaires) ont permis d’étudier l’effet de H7 et CDX5-1 sur le transport vectoriel de taurocholate[3H].

Résultats : La combinaison de CDX5-1 (25μM) avec la gentamicine augmentait le niveau de translecture induit par la gentamicine seule de p.R415X, p.R470X, p.R1057X et p.R1090X (codons de type TGA), dans les cellules NIH3T3. H7 à 10 ou 25 ng/μL induisait la translecture des codons de type TGA (p.R415X, p.R470X, p.R1057X, p.R1090X) et TAA (p.Y354X et E1302X) à des taux significativement plus élevés que la gentamicine. Comparé à un traitement par gentamicine seule, CDX5-1 (combiné à la gentamicine d’une part) et H7 d’autre part, augmentaient significativement l’expression de la protéine entière issue de la translecture pharmaco-induite de p.R1090X dans HEK et Can 10, en particulier à la membrane canaliculaire (Can10). Les activités de transport de taurocholate[3H] induites par ces deux traitements étaient supérieures à celle induite par le traitement par gentamicine seule.

Conclusion : Le CDX5-1 potentialise les effets de la gentamicine sur la translecture de CSP d’ABCB11 et permettrait ainsi de diminuer les doses de gentamicine et donc sa toxicité. Le composé H7 induit une translecture et augmente l’activité de transport des acides biliaires. Cette étude fournit de nouveaux espoirs d’améliorer la cholestase chez les patients atteints d’une PFIC2 due à des mutations non-sens.
L’auteur n’a pas transmis de déclaration de conflit d’intérêt

Références : 1- van Wessel DBE, Thompson RJ, Gonzales E, Jankowska I, Sokal E, Grammatikopoulos T et al. Genotype correlates with the natural history of severe bile salt export pump deficiency. J Hepatol 2020;73:84-93 2- Amzal R, Thebaut A, Lapalus M, Almes M, Grosse B, Mareux E et al. Pharmacological premature termination codon readthrough of ABCB11 in bile salt export pump deficiency: an in vitro study. Hepatology 2021;73:1449-1463
3- Baradaran-Heravi A, Balgi A. D, Zimmerman C, Choi K, Shidmoossavee F. S, Tan J. S. et al. Novel small molecules potentiate premature termination codon readthrough by aminoglycosides. Nucleic Acids Res 2016;44:6583-98 4- Benhabiles, H, Gonzalez-Hilarion S, Amand S, Bailly C, Prevotat, A, Reix P et al. Optimized approach for the identification of highly efficient correctors of nonsense mutations in human diseases. PloS One 2017 ;12 :e0187930

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