Introduction : L’ARN du VHB circulant (cirB-ARN) apparaît comme un biomarqueur non invasif prometteur de l’activité transcriptionnelle de l’ADNccc. Cependant, les caractéristiques moléculaires et les particules circulantes contenant le cirB-ARN in vivo restent à définir.

Patients et méthodes / ou matériel et méthodes :  Un protocole basé sur une ultracentrifugation en gradient de densité Iodixanol/Sucrose a été mis en place pour séparer les composants du sérum humain. Chaque fraction de densité a été analysée pour l’ADN/ARN du VHB par qPCR et par droplet digital (dd)PCR spécifique. Les protéines virales et celles associées aux vésicules extracellulaires (EVs) ont été analysées par ELISA et Western Blotting. La PCR 5’RACE a été utilisée pour discriminer les espèces d’ARN cirB dans le sérum des patients.

Résultats :  Les sérums de 7 patients non traités [4 AgHBe(+) et 3 AgHBe(-)] et d’un patient AgHBe(+) traité par entécavir ont été soumis à une ultracentrifugation de densité. Parmi les 10 fractions obtenues, la distribution spécifique des particules de Dane, des nucléocapsides non enveloppées et des particules subvirales a été déterminée par ELISA et Western Blotting pour les protéines virales, ainsi que la quantification de l’ADN du VHB. Le cirB-ARN a été principalement détecté dans les particules de type virion associées au noyau, mais en quantité 2 log10 inférieure à l’ADN du VHB. Cependant, le cirB-ARN était l’espèce prédominante dans les fractions de plus faible densité (1,17-1,18 g/ml) dépourvues de protéines virales. L’enrichissement en VEs dans ces fractions a été confirmé par la détection des marqueurs de VEs CD9 et CD81 par western blotting. La distribution de le cirB-ARN ne différait pas significativement entre les patients AgHBe(+) et AgHBe(-) et chez le patient traité à l’entécavir. De manière intéressante, dans un sérum avec une faible expression de l’Ag HBs (570 UI/ml), le cirB-ARN a été principalement détecté dans les fractions enrichies en EVs. Enfin, l’analyse 5′ RACE a permis d’identifier l’ARNpg, les ARNpg épissés et les transcrits HBx comme les trois principales catégories de cirB-ARN dans le sérum des patients.

Conclusion : Nos résultats indiquent que, dans le sérum des patients CHB, les EVs contribueent à la circulation des ARN-VHB en plus des particules de type virion. De plus, différents transcripts de l’ARN du VHB, en plus de l’ARNpg, peuvent être détectés in vivo. Dans l’ensemble, ces données pourraient contribuer de manière significative à la caractérisation des ARN-VHB comme nouveau biomarqueur viral.

Déclaration de conflit d’intérêt : AH et MH sont employés de Roche Diagnostics

Remerciements : Ce travail est soutenu par le programme Investissements d’Avenir de l’Agence Nationale de la Recherche (projet CirB-RNA – ANR-17-RHUS-0003).