Introduction : L’ARN du VHB circulant (cirB-ARN) reflète l’activité transcriptionnelle de l’ADNccc intrahépatique, représentant ainsi un biomarqueur sérique non invasif prometteur pour la réduction ou l’inactivation du pool d’ADNccc. Bien que plusieurs études aient suggéré que les voies de sécrétion cellulaire puissent déterminer le sort de ces ARN, les régulateurs spécifiques impliqués restent largement inconnus.

Patients et méthodes / ou matériel et méthodes :  L’expression des protéines candidates a été analysée par Western Blotting et RT-qPCR dans le lysat cellulaire et le surnageant d’hépatocytes infectées par le VHB. L’interaction des protéines avec le ARN VHB a été étudiée par RNP-IP (Ribonucleoprotein-Immunoprecipitation) et par l’essai pull down à la biotine. L’ultracentrifugation à densité Iodixanol/Sucrose a permis d’isoler les fractions enrichies en exosomes à partir des sérums de 5 patients non traités, de 2 patients atteints d’une infection chronique HBeAg(-) et de 2 patients atteints d’hépatite B chronique (CHB) traités par NUC.

Résultats :  Parmi les protéines de liaison à l’ARN analysées, l’expression de la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène A1 (hnRNPA1) a augmenté à la fois dans les lysats cellulaires et les surnageants des cellules HepG2-NTCP et des hépatocytes primaires humains lors de l’infection par le VHB. hnRNPA1 a également été détectée dans le sérum des patients CHB et, après ultracentrifugation de densité des échantillons de sérum, hnRNAP1 a été principalement détectée dans les fractions enrichies en exosomes. Des études de perte de fonction dans des cellules HepG2-NTCP ont indiqué que la régulation négative de hnRNAP1 était associée à une expression réduite des marqueurs d’exosomes CD9 et CD81 dans le surnageant cellulaire, ainsi qu’à une diminution de la sécrétion de le cirB-ARN dans les fractions d’exosomes. L’IP anti-CD81 a confirmé l’association entre hnRNAP1 et les exosomes. Les expériences RNP-IP ont révélé que hnRNPA1 était capable de se lier à la région 5′ de l’ARN de 3,5Kb et à la région 3′ commune à tous les transcrits du VHB. Des sites de liaison spécifiques pour hnRNAP1 sur les ARN du VHB ont été cartographiés par des essais de pull-down à la biotine.

Conclusion : Dans l’ensemble, nos données suggèrent que hnRNPA1 se lie directement aux ARN du VHB et peut fonctionner comme un nouveau mécanisme pour l’exportation des ARN du VHB in vivo.

Conflit d’intérêt : AH et MH sont employés de Roche Diagnostics

Remerciements : Ce travail est soutenu par le programme Investissements d’Avenir de l’Agence Nationale de la Recherche (projet CirB-RNA – ANR-17-RHUS-0003).