Introduction :
Le cancer primaire du foie est la 3e cause de mortalité liée au cancer, et le carcinome hépatocellulaire (CHC) représente plus de 80 % des cas1. Aujourd’hui, 70% des patients atteints de CHC ne répondent pas aux traitements2. Il faut donc disposer d’un modèle fiable pour développer de nouvelles thérapies. Nous avons ici développé et caractérisé 4 modèles de cancer du foie in ovo basés sur la greffe de cellules tumorales humaines sur la membrane chorioallantoïdienne (CAM) de l’embryon de poulet.

Patients et méthodes / ou matériel et méthodes :
4 lignées cellulaires de cancer du foie (HepG2, Hep3B, HuH7, et PLC/PRF/5) ont été greffées in ovo au jour 9 de développement embryonnaire (EDD), avant d’être collectées à EDD18. La survie des œufs et le poids des tumeurs ont été mesurés afin de déterminer les conditions optimales de greffe. Les tumeurs ont ensuite été prélevées, fixées dans du formol et incluses dans de la paraffine pour des études histologiques : colorations à l’hématoxyline/éosine (noyau/cytoplasme), au rouge Sirius (collagène), ainsi que des études immunohistochimiques anti-CD3 (lymphocytes T) et anti-Ki67 (prolifération). Enfin, des études de séquençage de l’ARN ont été réalisées sur le transcriptome humain, permettant à la fois une comparaison in vitro/in ovo, mais aussi une description approfondie du modèle.

Résultats :
Nous avons pu établir les conditions optimales de greffe selon la survie globale de l’œuf et la masse tumorale collectée. La survie globale de l’œuf allait ici de 71,4 % (HepG2) à 88 % (HuH7) dans ces conditions (Figure 1A, B). La morphologie générale de la croissance tumorale in ovo dépendait de chaque lignée cellulaire (Figure 1C). L’accumulation de collagène est homogène entre les lignées cellulaires, sauf pour le modèle in ovo de HepG2 où elle est moins importante (Figure 2A, B). Nous avons observé la plus forte capacité de prolifération cellulaire dans le modèle in ovo de PLC/PRF/5 (Figure 2A, C). La masse tumorale moyenne, mais aussi l’infiltration de lymphocytes T, était la plus faible dans le modèle de HuH7 in ovo (Figure 2A, D). L’analyse des données de séquençage de l’ARN a révélé une grande homogénéité des modèles in ovo, ainsi que d’importantes différences dans l’enrichissement des ensembles de gènes associés au CHC humain et à l’inflammation (Figure 3).

Conclusion :
Nous avons développé 4 modèles différents de cancer du foie humain in ovo, chacune ayant ses caractéristiques spécifiques, ce qui permet un panel d’études large et varié. Ce projet fournit une caractérisation approfondie des modèles in ovo de CHC, et donne des arguments rationnels qui pourraient conduire au remplacement des modèles animaux conventionnels dans la recherche préclinique sur le CHC.

Les auteurs déclarent ne pas avoir de conflit d’intérêt

Remerciements :
Les auteurs tiennent à remercier l’ANRT (Association Nationale de la Recherche et de la Technologie) ainsi que la Région Auvergne Rhône Alpes pour leur soutien dans ce projet.

Références :
1. Vogel, A., Meyer, T., Sapisochin, G., Salem, R. & Saborowski, A. Hepatocellular carcinoma. The Lancet 400, 1345–1362 (2022).
2. Finn, R. S. et al. IMbrave150: Updated overall survival (OS) data from a global, randomized, open-label phase III study of atezolizumab (atezo) + bevacizumab (bev) versus sorafenib (sor) in patients (pts) with unresectable hepatocellular carcinoma (HCC). J. Clin. Oncol. 39, 267–267 (2021).

Figure 1 :