Introduction :
Le virus de l’hépatite D (VHD) est responsable de la forme d’hépatite la plus grave. La quantification de la charge virale (CV) ARN VHD est un élément essentiel dans la prise en charge des patients. Plusieurs techniques utilisant commerciales ou « maison » la technologie de RT-PCR en temps réel ont été développées. Les performances de la nouvelle version EBX-071 du premier kit pangénomique EurobioPlex HDV kit (EBX-004) commercialisé en 2016, sont ici évaluées.

Patients et méthodes / ou matériel et méthodes :
Le standard international OMS disponible ainsi que plusieurs échantillons de génotypes et de charges virales diverses de notre collection ont été utilisés pour évaluer la répétabilité et la reproductibilité des résultats ainsi que la sensibilité (limite inférieure de détection LLOD et de quantification LLOQ) du nouveau kit EBX-071. La spécificité a été étudiée sur 100 échantillons VHD négatif de donneurs de sang, 100 échantillons VHD positifs de patients, et 25 échantillons positifs pour les virus VIH, VHA, VHB, VHC et VHE. La comparaison des performances globales des deux versions du kit (EBX-004 et EBX-071) a été réalisée sur 561 échantillons cliniques comprenant des souches des 8 génotypes VHD connus.

Résultats :
Les standards de quantification du kit EBX-071 sont désormais fournis dans un format prêt à l’emploi. L’ensemble du processus est validé par la détection simultanée d’un contrôle interne endogène. Dans 98% des cas (1453/1478), un résultat valide a été obtenu. Le coefficient de variation était < 5% pour les expériences de répétabilité (24 échantillons du standard OMS, dilués 1/100e et au 1/1000) ; et < 10% pour la reproductibilité des résultats (n=120). La spécificité est de 100 %. Aucune interférence ou inhibition n’a été constatée avec des titres élevés de triglycérides ou de bilirubine dans les échantillons. Des résultats similaires ont été obtenus sur des échantillons de plasma et de sérum appariés (n=24, différence moyenne de 0,1 log UI/mL). La LLOD et la LLOQ étaient respectivement à 20 UI/mL et 50 UI/mL (dilutions du standard OMS, confirmées avec des échantillons de tous les génotypes). Des résultats étaient concordants à 98,9 % entre les deux versions du kit (6 discordants/561 tests, correspondant à des échantillons ayant une CV < 3 log UI/mL). EBX-071 a donné de façon constante des valeurs inférieures de 0,88 log UI/mL. La quantification du standard OMS dilué au 1/1000 avec le kit EBX-071 a donné des valeurs très proches de sa valeur théorique (2,75 vs 2,76 log/mL).

Conclusion :
Le test EurobioPlex EBX-071, utilisé sur un thermocycleur CFX96 avec une extraction des ARN sur le m2000sp (Abbott), a montré des performances excellentes. Sur le plan pratique, le kit a été amélioré. La gamme standard, prête à l’emploi et recalibrée permet un meilleur ciblage de la valeur du standard OMS, étape cruciale vers la standardisation des techniques de quantification de la CV ARN VHD.

Les auteurs déclarent avoir un conflit d’intérêt